Atliekant ikiklinikinę bioanalizę, biologinės matricos-serumo ar plazmos- pasirinkimas yra daugiau nei įprastas sprendimas. Tai tiesiogiai veikia duomenų tikslumą, tyrimo patikimumą ir verčiamumąfarmakokinetika (PK)irfarmakodinaminis (PD)rezultatus. Prisys Biotech, ikiklinikinis CRO, besispecializuojantis ne-žmogaus primatų (NHP) modeliuose ir didelių gyvūnų transliacijos tyrimuose, pabrėžiame apgalvotą matricos pasirinkimą kaip pagrindinį ankstyvo vaistų kūrimo žingsnį. Šiame straipsnyje aprašomi fiziologiniai skirtumai, analitinės pasekmės ir strateginiai svarstymai, susiję su matricos pasirinkimu.
Biologinių matricų supratimas
Tiek serumas, tiek plazma yra gaunami iš viso kraujo, tačiau jų biocheminė sudėtis labai skiriasi dėl krešėjimo faktorių buvimo ar nebuvimo.
Serumasyra skysta dalis, gaunama po kraujo krešėjimo. Krešėjimo metu fibrinogenas virsta fibrinu, sudarydamas tinklelį, kuris sulaiko kraujo ląsteles. Po centrifugavimo likęs skystas-serumas-yra baltymų, hormonų, nukleorūgščių ir kitų analičių, bettrūksta fibrinogeno ir tam tikrų krešėjimo faktorių.
Plazma, kita vertus, gaunamas pridedant antikoaguliantų (pvz., EDTA, heparino, citrato), kad būtų išvengta krešėjimo, o po to centrifuguojama. Plazma išlaikofibrinogenas ir krešėjimo faktoriai, pateikiantis artimesnį vaizdąfiziologinė būsena in vivo.
Matricos pasirinkimas: kodėl tai svarbu
Serumo ir plazmos pasirinkimas nėra savavališkas. Daugelio analičių koncentracija skiriasi priklausomai nuo matricos. Matricų maišymas tame pačiame tyrime gali pakenkti rezultato vientisumui, sudarymuimatricos standartizavimasbūtini norint atlikti teisingus palyginimus ir laikytis teisės aktų.
Pagrindinis išsinešimas:Tam tikrai analitei viso tyrimo metu visada naudokite nuoseklią matricą.
Plazmos privalumai
Plazmai vis labiau teikiama pirmenybė šiuolaikinėje bioanalizėje, ypač atliekant didelius{0}}gyvūnų ir NHP tyrimus, dėl šių veiklos ir mokslinių pranašumų:
1. Greitesnis mėginių apdorojimas
Plazma gali būti centrifuguojama iš karto po surinkimo. Priešingai, serumui reikia a30 minučių krešėjimo laikotarpis, kuris gali būti ilgesnis pacientams, sergantiems koagulopatija arba gydomiems antikoaguliantais. Dėl nepilno krešėjimo gali susidaryti mikrokrešuliai, kurie trukdo tolesniems tyrimams ar prietaisams.
2. Didesnis derlingumas
Plazma paprastai sudaro ~ 55% viso kraujo tūrio, o serumo išeiga yra ~15–20% mažesnė. Atliekant tyrimus, kuriuose mėginio tūris yra ribotas,-pavyzdžiui, vaikų ar hemofilijos modeliuose,{5}}plazma leidžiadidesnis analitinis lankstumas.
3. Sumažinti krešėjimo trukdžiai
Krešėjimo procesas keičia analitės lygį, suaktyvindamas ląstelių metabolizmą ir išskirdamas tarpląstelinį turinį. Pavyzdžiui,kalio, LDH ir ASTkoncentracija serume dažnai yra dirbtinai padidinta. Priešingai, analitės mėgstagliukozėarbatrombocitųgali sumažėti krešėjimo metu, todėl plazma yra stabilesnis pasirinkimas tam tikriems taikiniams.
4. Mažesnė tyrimo sutrikimo rizika
Serumo mėginiuose dažnai yra fibrino gijų arba mikrokrešulių, kurie gali blokuoti analitinius instrumentus arba trukdyti imuniniams tyrimams. Tinkamai apdorojus plazmą šios problemos visiškai išvengiama.
Serumo privalumai
Nepaisant plazmos pranašumų, serumas išlieka standartine matrica daugelyje nustatytų protokolų ir turi savų privalumų:
1. Mažesnė ląstelių užteršimo rizika
Serumo mėginiuose vyksta visas krešėjimo procesas, efektyviai pašalinant daugumą ląstelių elementų. Priešingai,plazma gali sulaikyti trombocitus arba ląstelių fragmentusjei centrifugavimas yra neoptimalus, dėl to laikui bėgant arba su užšaldymo{0}}atšildymo ciklais gali pablogėti mėginio vientisumas.
2. Konkrečių analičių stabilumas
Kai kurios analitės rododidesnis cheminis stabilumasserume nei plazmoje. Pavyzdžiui, gliukozė gali būti stabilesnė serume esant aplinkos sąlygoms, nors tai priklauso nuo analitės.
3. Jokių antikoaguliantų trukdžių
Plazmos paruošimui reikalingi antikoaguliantai, kai kurie iš jų (pvz., EDTA, heparinas) galitrukdyti tolesniems aptikimo metodams, ypač imunologiniai tyrimai. Serumas šios rizikos visiškai išvengia.
4. Lengvas{0}}tyrimų palyginimas
Dėl istorinio paplitimo daugelis atskaitos diapazonų, standartinių metodų ir senų duomenų rinkinių yra pagrįsti serumu. Tam tikroms programoms tai palengvinalyginamoji analizė ir reguliavimo pateikimas.
Tinkamos matricos pasirinkimas: strateginiai svarstymai
Universalaus atsakymo nėra. Matricos pasirinkimas turi atitikti:
- Tikslinės analitės savybės
- Analizės metodo reikalavimai
- Tyrimo tvarkaraščiai ir mėginių tvarkymo apribojimai
- Apimties apribojimai (ypač NHP ar ligų modeliuose)
- Reguliavimo ar istoriniai precedentai
Pagrindinė rekomendacija: Nemaišykite matricų tame pačiame projekte. Pasirinkę, nuosekliai naudokite tą pačią matricą, kad išvengtumėte kintamumo ir užtikrintumėte duomenų palyginamumą.
Matricos pasirinkimas yra svarbus, tačiau dažnai nepastebimas sprendimas atliekant ikiklinikinę bioanalizę. „Prisys Biotech“ padedame vaistų kūrėjams priimti įrodymais pagrįstus sprendimus,{1}}kurie užtikrina analizės nuoseklumą ir sėkmę. Nesvarbu, ar naudojame plazmą, kad atspindėtume in vivo fiziologiją, ar serumą, kad atitiktume senus duomenų rinkinius, savo bioanalitines strategijas pritaikome prie konkrečių kiekvieno tyrimo poreikių.
Apie Prisys Biotech
„Prisys Biotech“ yra ikiklinikinis CRO, kurio specializacija yra didelių{0}}gyvūnų farmakologija ir transliaciniai tyrimai, daugiausia dėmesio skiriantne{0}}žmoginiai primatai (cynomolgus beždžionės). Mūsų integruotos bioanalitinės paslaugos skirtos palaikyti aukštos-kokybės PK, PD ir toksikologinius IND-tyrimus, įgalinančius ir ankstyvosiose{3}}fazėse.
